微生物檢測
微生物檢測是一種應(yīng)用微生物學(xué)的方法,用來測定樣品中微生物生長和繁殖狀況的方法。 主要用于食品中微生物檢測的試劑有平板菌落計數(shù)法、平板計數(shù)法及瓊脂培養(yǎng)基法等。 微生物檢測有許多種類,常見的包括細(xì)菌、真菌和病毒等,其中細(xì)菌是最常見的。 一般食品原料中微生物存在的狀態(tài)是以菌落為單位,一般用菌落總數(shù)來表示。
1、平板菌落計數(shù)法
平板計數(shù)法是一種常用的快速檢測方法,可直接在培養(yǎng)基上測定食品或原料的菌落總數(shù)。 具體操作是將待測樣品放入裝有液體培養(yǎng)基(或瓊脂)的試管中,然后在一定條件下培養(yǎng),直至形成穩(wěn)定菌落(5~10分鐘),再用分光光度計測量其波長并記錄數(shù)值。 一般可按以下步驟進行:①將待測樣品制成含有1個菌落的培養(yǎng)物。 ②在一定條件下進行測定。 ③計算出菌落計數(shù)結(jié)果,以菌落總數(shù)多少表示菌落存在的狀態(tài)和數(shù)量。 平板菌落計數(shù)結(jié)果一般以5~10 (cm)/m (個)或10~20 (cm/個)為單位。 這種方法雖然速度快,但由于其培養(yǎng)時間較長和無法測量出培養(yǎng)基內(nèi)所有菌落對計數(shù)結(jié)果產(chǎn)生影響等原因使之并不適用于食品及原料中細(xì)菌總數(shù)的直接測定及細(xì)菌總數(shù)存在菌落增加情況下對衛(wèi)生要求較高的樣品時。
2、平板計數(shù)法及瓊脂培養(yǎng)基法
平板計數(shù)法又稱平板劃線計數(shù)法,它是根據(jù)微生物的生長速度與菌落直徑成正比關(guān)系進行定量測定。 平板計數(shù)法可分為菌落計數(shù)法和數(shù)字平板計數(shù)法兩類。 菌落計數(shù)法:按單位體積內(nèi)每克或每毫升菌落數(shù)的計算公式,分別對各種微生物進行計數(shù)和表示。在實際工作中應(yīng)用最多的是細(xì)菌計數(shù)法、真菌計數(shù)法及瓊脂培養(yǎng)基法。 數(shù)字平板計數(shù)法主要用于食品、生物制品等樣品的菌落總數(shù)測定,如需對樣品進行菌落數(shù)量檢驗,可以采用傳統(tǒng)的數(shù)字平板計數(shù)法,在實際工作中使用較多的是美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)制定的數(shù)字平板計數(shù)法。 瓊脂培養(yǎng)基法:是在傳統(tǒng)方法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新方法,目前廣泛應(yīng)用于食品、生物制品、藥品及生物制品等樣品中各種微生物的快速檢測,其操作簡便、快速,且無相應(yīng)試劑盒和培養(yǎng)基可重復(fù)使用等優(yōu)點,但對檢測環(huán)境要求較高。
3、平板計數(shù)
平板計數(shù)法是用來檢測食品中的微生物。 適用于食品衛(wèi)生檢驗、藥品檢驗以及醫(yī)院藥敏試驗等。 優(yōu)點:操作簡單,方便,結(jié)果快速。 缺點:設(shè)備要求高,需專業(yè)人員操作的儀器和技術(shù),且儀器維護、保養(yǎng)成本高;需要專業(yè)培訓(xùn)的人員進行操作。 操作:1.把新鮮原料置于密閉容器中,加水煮沸1~2 min;2.按產(chǎn)品配方混合均勻(每批混合應(yīng)在2h內(nèi)完成);3.把混合好的樣品放入沸水中加熱30 min,然后放入清潔的容器中冷卻1 min,再加水到指定比例,充分混合均勻;4.將樣品放入平板上繼續(xù)培養(yǎng)15 min左右;5.最后用接種到已滅菌的器皿中,并在37℃下培養(yǎng)48h以上。 注意事項:1.必須嚴(yán)格控制原料、半成品和成品中微生物污染(如大腸桿菌、酵母菌、霉菌、放線菌等)2.使用前應(yīng)對產(chǎn)品進行充分處理。
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